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  • 联系人:

    赵明

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    实验室仪器 / 设备、技术服务、耗材、试剂

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【高效提取】怎么选择最适合自己使用的cfDNA提取试剂盒?

1526 人阅读发布时间:2025-03-11 14:15

关于cfDNA的提取物

cfDNA(cell-free DNA)即游离 DNA,是指存在于细胞外的 DNA,它在血液、唾液、尿液等多种生物体液中都有存在。

cfDNA 主要来源于细胞凋亡、坏死或主动分泌等过程释放到细胞外的 DNA 片段。在血液中,它主要存在于血浆或血清中,与血细胞等成分相分离。此外,在其他生物体液如脑脊液、胸腔积液、腹水等中也能检测到 cfDNA。

 

一、cfDNA 不同的提取方法

01 酚 - 氯-仿抽提法

利用酚、氯-仿等有机溶剂对蛋白质和核酸的不同溶解性,通过多次抽提使蛋白质等杂质溶解于有机相,而 DNA 则保留在水相,再通过乙醇沉淀等步骤获得纯化的 cfDNA。该方法的优点是提取的 DNA 纯度较高,缺点是操作流程较为繁琐,需要使用有毒的有机溶剂,且对实验人员的操作技能要求较高。

02 磁珠法

基于磁珠表面的特殊基团与 DNA 分子之间的特异性吸附作用,在特定的缓冲液体系中,磁珠能够选择性地吸附 cfDNA,然后通过外加磁场将磁珠与其他杂质分离,再经过洗涤、洗脱等步骤获得纯净的 cfDNA。其优点是操作简便、快速,易于实现自动化,且提取效率较高,可同时处理多个样本。

03 硅胶膜离心柱法

利用硅胶膜在高盐、低 pH 值条件下对 DNA 的特异性吸附特性,将生物样本中的 cfDNA 吸附到硅胶膜上,而蛋白质、多糖等杂质则被洗脱除去,最后通过低盐、高 pH 值的洗脱液将 cfDNA 从硅胶膜上洗脱下来。该方法操作相对简单,成本较低,适用于小规模样本的提取。

 

二、影响提取的因素

样本类型

不同生物体液中的 cfDNA 含量和性质存在差异。一般来说,血液中的 cfDNA 含量相对较高,是最常用的样本来源,但不同个体、不同疾病状态下血液 cfDNA 含量也会有所不同。

保存条件

样本采集后若不能及时进行提取,保存条件至关重要。如血液样本一般需在 4℃下保存,长时间放置或保存温度不当可能导致 cfDNA 降解或被核酸酶消化,影响提取效果。

 

三、如何选择cfDNA提取试剂盒

当处理样本数量较少,或处理某些特殊珍惜样本时,由于数量和样本特殊性,更加倾向于使用回收柱,进行回收。当样本数量相对较多,需批量进行处理时,为节省人工成本,避免因人为因素引入的实验误差,更推荐使用磁珠法进行样本处理。

 

四、简石-柱式回收方案

简石-磁珠回收的方案

TD476采用回收简石特有回收柱技术进行游离DNA提取回收,可采用传统的离心法进行样本处理,亦可搭配简石真空多联器与真空泵使用,免去繁琐的离心步骤,可以在较短时间内处理较大样本量。

TB476采用磁珠法进行游离DNA提取纯化,可根据客户需求提供兼容磁力架提取的试剂盒,亦可提供预分装,适配高通量提取仪的试剂盒。可供自动化高通量客户进行选择。

关于柱式回收法—TD476

【使用介绍】

● 可从 10ml 以内的血清/血浆,1ml 以内的羊水或脑脊液中提取到高纯度的游离 DNA。

● 获得的 DNA 产量高、纯度好,可以直接用于酶切、PCR、高通量测序等分子生物学实验。

● 样品种类: 血清,血浆,羊水和脑脊液(CSF)

● 处理的体积量: 

血浆- 单次离心:最多 3ml 两次离心:最多 10ml

血清- 最多 10ml

羊水- 最多 1ml

脑脊液- 最多 1ml

【产品特性】

● DNA 纯度: 获得的 DNA 产量高、纯度好, 可以直接用于 qPCR 高通量测序等各种分子生物学实验。

● DNA 回收情况: 回收的 DNA≥100bp(本试剂盒针对无细胞的 DNA 提取经过优化),总量根据不同的样品个体差异可能会比较大。一般从血清或血浆中提取到的 DNA 浓度在 1-100 ng/ml。

 

实现最高的cfDNA产量

图片简单的工作流程

※ 可手动操作完成整个提取流程 

※ 兼容主流“开放”自动化平台实现自动化提取

图片

 

关于磁珠法提取cfDNA—TB476

【使用介绍】

● 可从 10ml 以内的血清/血浆,1ml 以内的羊水或脑脊液中提取到高纯度的游离 DNA。

● 获得的 DNA 产量高、纯度好,可以直接用于酶切、PCR、高通量测序等分子生物学实验。

● 样品种类: 血清,血浆,羊水和脑脊液(CSF)

● 处理的体积量: 

血浆- 单次离心:最多 3ml 两次离心:最多 10ml

血清- 最多 10ml

羊水- 最多 1ml

脑脊液- 最多 1ml

【产品特性】

● DNA 纯度: 获得的 DNA 产量高、纯度好, 可以直接用于 qPCR 高通量测序等各种分子生物学实验。

● DNA 回收情况: 回收的 DNA≥100bp(本试剂盒针对无细胞的 DNA 提取经过优化),总量根据不同的样品个体差异可能会比较大。一般从血清或血浆中提取到的 DNA 浓度在 1-100 ng/ml。

● 需要的仪器设备:水浴锅或者金属浴(55℃),磁力架,微型离心机或立式离心机。

 

广泛的样本兼容性

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